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          高液相色谱仪1100测定分析人血浆中双氯西林和阿莫西林
          发表时间:2018/6/27 17:04:25  |  点击率:3495

           1,仪器与试剂

           安捷伦高效液相色谱仪1100,附紫外检测器(SPD-10Avp/10Avvp);2010色谱工作站;AT-230ColumnHeater。双氯西林的精制品、阿莫西林精制品(内标氟氯西林精制品(含量94.0%)、内标替硝唑精制品(含量97.2%);甲醇、乙腈均为一级色谱纯,纯度99.9%);水为去离子水;其余试剂均为分析纯。

           

           2,色谱条件

           双氯西林的色谱条件:色谱柱(150mm×4.6mm,5);流动相0.05mol-L磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.7g,溶于1000mL去离子水中,用氢氧化钾溶液调pH4.5,过滤)一乙腈(68:32),加0.3%三乙胺;流速1.0mL·min~;检测波长225nm;柱温25;进样量20trL;内标氟氯西林。阿莫西林的色谱条件:岛津Shim—packVP—ODS色谱柱(150mm×4。6mm,5);流动相0.033mol·L磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.22g、磷酸氢二钾2.610g,溶于1000mL去离子水中用氢氧化钾溶液调pH7。2,过滤)一甲醇(88:12)流速1.0mL·min~;检测波长229nm;柱温20℃进样量20trL;内标替硝唑。

           3,血浆样品的处理与测定

           精密移取空白血浆450L,分别加人双氯西林或阿莫西林标准工作液50,内标氟氯西林或替硝储备液5,混匀后,加入冷冻的甲醇500,旋涡混合,置于4℃冰箱15min,14000r·min一离心10min,取20L上清液进样。

           4,方法与结果

           色谱分离在上述色谱条件下,双氯西林及内标氟氯西林与血浆得到完全分离,其保留时间分别为7.1min和5.5min。

           阿莫西林具有两性化合物的性质,且与血浆中的极性物质性质相近,因此血浆样品预处理与色谱分离十分困难。资源等用固相萃取法、CarlqvistJ等用柱切换法来进行样品预处理,但仪器设备复杂、操作烦琐。故阿莫西林HPLC法多用直接沉淀蛋白法来处理血样,调控柱温的方式,建立了相同的样品预处理方法,不同的色谱条件分离分析人血浆中双氯西林和阿莫西林的高效液相色谱法

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